在常温下由化学反应产生的光，产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导至的发光现象。化学发光是一个多步骤的过程。

　　化学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)诞生于1977年，是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来建立的微量测定技术，因此该技术灵敏度高、线性范围宽、应用范围广。而且CLIA与放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作简便、反应快速、无放射污染，仪器简单稳定且可以实现自动化。

　一、化学发光免疫分析包含免疫分析系统和化学发光分析系统。

　　免疫分析系统是指：抗原抗体标记化学发光物质或酶，经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。

　　化学发光分析系统是指在免疫反应结束后，利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号测量仪进行检测。根据化学发光标记物与发光强度的关系，可利用标准曲线计算出被测物的含量。

　　ECL化学发光法是目前常用、灵敏的WesternBlot检测方法。由于这些底物不会在膜表面沉淀、牢牢结合在膜上，因此可以通过一抗二抗去除液(Strippingbuffer)将亲和结合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体，也要足够温和使转移的目标蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

二、化学发光免疫分析的类型

分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。

1、直接化学发光免疫分析

用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗 原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和 NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、 发光 。

由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量

2、化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成 固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度

辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析

该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包 被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合 物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发 光增强剂使产生化学发光。

三. 电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联呲啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。

三、化学发光免疫学优点：

1.灵敏度高：是其关键的优越性。它能够检出放射性免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断有着十分重要的意义。

2.宽的线性动力学范围：发光强度在4-6个量级之间，与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色酶联免疫吸光度（OD值）2.0 的范围相比，优势十分明显。虽然同位素放射免疫也有较宽的线性动力学范围，但是放射性限制其应用。

3.光信号持续时间长：其光信号持续时间可达数小时甚至可达一天，简化了实验操作及测量。

4.分析方法简便快速：绝大多数分析测定仅需加入一种试剂（或符合制剂）的一步模式。

5.结果稳定、误差小：样本本身发光，不需要额外光源，避免了外来因素的干扰（光源稳定性、光散射、光波选择器），分析结果稳定可靠。

6.安全性好及使用期长：目前为止还未发现化学发光免疫分析试剂的危害性；另外这些试剂稳定，保存期可以达到一年之久。